一、禽白血病病毒檢測試劑盒
二、通用名稱:禽白血病病毒檢測試劑盒 (實時熒光PCR法)
三、包裝規格 50T/盒
四、預期用途:
適用于禽白血病病毒檢測,可用于臨床禽白血病病毒感染的輔助診斷,但不作確診使用。
五、原理:
針對引起禽白血病的禽C型反錄病毒群的病毒基因組高度保守區域設計特異性引物和探針,在反應體系中含禽C型反錄病毒群的病毒基因組模板的情況下,PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應通道信號進行實時監測和輸出,實現檢測結果的定性分析。
六、組成:
RT-PCR反應液、混合酶液、陽性對照、陰性對照。
七、樣品DNA的制備
用自選方法提取Cps DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PGR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
制備Cps標準曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
1、標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
2、用帶芯槍頭分別加入45μL超純水(最好用帶芯槍頭,下同)
3、先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至0E7拷貝/μL)
4、在6號管中加入5μL10E7拷貝/uL的Cps陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照.
八、技術參數
1、符合行業標準SN/T1686-2005《新城疫病毒中強毒株檢測)法:熒光RT-PCR法》的檢測要求,可用于禽肉、禽類組織臟器禽類排泄和分泌物,及其泄殖腔和咽喉拭樣中新城疫病毒的檢測。
2、靈敏度:對于接種的雞胚尿囊液,檢測的zu高稀釋度可達0-8~10-7,與雞胚病毒分離方法的靈敏度接近。定量檢測線性范圍可達10-1010拷貝/ml。
3、特異性:采用新基因序列數據庫設計,并通過系統驗證新城疫病毒RT-PCR能夠檢測所有已知新城疫病毒毒株。對于其它禽類感染因子,本試劑盒檢測結果為陰性
4、產品盒組成:(不包括新城疫病毒RNA提取試劑,用戶可采用通用型病毒RNA提取試劑盒或試劑盒推薦的提取方法。)
組成成份(48T/kit)
1、RNA提取液30ml 1瓶
2、DEPC水5ml 1瓶
3、新城疫病毒RT-PCR一步法反應液 920u|1管
4、逆轉錄酶(5U/ul)
5、使用說明書一份